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安捷伦1260HPLC工作原理及简单操作PPT学*课件

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Agilent 1260 HPLC 工作原 理及简单操作 1 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 ? 培训目的: 1.了解HPLC各模块的原理; 2. 掌握HPLC各模块日常维护的要点; 3. 掌握开机,关机。 2 Agilent 1260 HPLC 工作原理及简单操作 ? 内容: 一、 HPLC各模块的原理及维护; 二、开机/关机操作; 三、讨论; 四、评估。 3 一 、 HPLC各模块工作原理及维护 HPLC: 高效液相色谱仪(High Performances Liquid Chromatography)。 由储液器、泵、进样器、色谱柱、检 测器、记录仪等几个部分组成。 工作时储液器中的流动相被高压泵打 入系统,样品溶液经样品进样器进入流 动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中 具有不同的分配系数,在两相中做相对 运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分 配过程,各组分在移动速度上产生较大 的差别,被分离成单个组分依次从柱内 流出,通过检测器时,样品浓度被转换 成电信号传送到记录仪,数据以图谱形 式打印出来。 4 HPLC各模块的工作原理及维护 关于溶剂 ? 所有溶剂应为HPLC级,水应为二次超纯水; ? 所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜,过滤 有机相应使用有机相滤膜,不能混用。每一次滤膜只 能用一次,不能重复使用; ? 如果没有在线脱气机,所有溶剂应经过超声脱气; ? 水易滋生藻类,避免直接照射,过滤水最好使用不要 超过两天; ? 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮 化钠; ? 注意溶剂的相容性,避免使用不相容的溶剂; ? 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂; ? 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞,必要时小心拿 下用强酸(35%硝酸)浸泡时,用水冲洗,但不要使 用超声处理。 5 HPLC各模块的工作原理及维护 关于在线真空脱气机 ? 在线真空脱气机的管路容量为 12ml,压力范围为110Torr190Torr。 ? 为保证脱气机的良好使用性能, 在下述情况下需要用注射器抽洗 脱气机管路,每个通道使用不低 于30ml的异丙醇。 1,新的脱气机或新的管路; 2,更换了溶剂,尤其是缓冲盐与有 机相之间、两个不相容流动相之 间的互换时; 3,输液泵关闭了一段时间,或使用 挥发性溶剂混合物。 6 HPLC各模块的工作原理及维护 关于泵:(四元泵) 7 HPLC各模块的工作原理及维护 关于泵(泵头组件) 柱塞杆Piston 活塞外框架 泵头密封垫 主动输入阀AV Seal Wash组件 泵腔 出口球阀BOV 清洗阀Purge Valve 8 HPLC各模块的工作原理及维护 更换过滤白头 清洗阀PurgeValve 过滤白头 金密封垫 聚四氟乙烯密封垫 ? 在清洗阀中的过滤白头需要更换,在清 洗状态下,设置流量为5ml/min,此时 系统压力如果超过10bar,则需更换过 滤白头。 ? 更换步骤: 1,关闭泵电源; 2,用扳手去掉通往进样器上的毛细管,拔 掉废液管; 3,用专用扳手小心把清洗阀卸下来; 4,轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫, 将过滤白头拿出; 5,更换新的过滤白头,装上聚四氟乙烯密 封垫和金密封垫; 6,装上清洗阀; 7,连接管路。 9 HPLC各模块的工作原理及维护 更换过滤白头 1,去掉毛细管,废液管 2,卸掉清洗阀 3,更换过滤白头 4,更换白头,装好清洗阀 10 HPLC各模块的工作原理及维护 泵的注意事项 1,溶剂的过滤、脱气; 2,避免使用腐蚀性溶剂; 3,在满足分析的前提下,尽可能使用 较低的流速—较低的系统压力。 4,更换过滤白头; 5,考虑溶剂的相容性; 6,尽可能使用新鲜的水; 7,使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要 选配柱塞清洗组件,清洗液不能干 涸。 8,使用正相溶剂比如环己烷时,建议 使用聚乙烯密封垫,部件号为09051420,在0—200Bar下使用聚乙烯 密封垫比标准密封垫更耐磨损。 ? 四元泵: 四元泵多通道比例阀MCGV使 用时注意,缓冲溶液要放在A、 D通道,以避免盐颗粒析出。建 议A通道:水;B、C通道:有 机溶剂;D通道:缓冲溶液。 11 HPLC各模块的工作原理及维护 样品准备 关于进样器 过滤样品,确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品 进样量尽量小 样品完全溶解在流动相中 样品没有完全溶解 12 HPLC各模块的工作原理及维护 关于进样器 准备位置 调用样品瓶 吸样品 进样和运行位置 13 标准进样过程 ... HPLC各模块的工作原理及维护 自动进样器 ?样品要干净、经过过滤。 ? 洗针:把样品残留降低到最 小限度,可降低进样的记忆 效应,洗针瓶最好不要加瓶 垫。 ? 多次吸液 用于进样量大于100ul 14 HPLC各模块的工作原理及维护 关于恒温柱箱 ? 控制范围:最高80?C,低温低于 室温10?C。 ? 预热块体积左面为3ul,右面为6ul, 除非有特殊要求,左右温度应保 持一致。 ? 一定要关闭前面板。 15 HPLC各模块的工作原理及维护 关于原理 16 HPLC各模块的工作原理及维护 关于色谱柱保护 过滤所有的溶剂和样品 使用保护柱 仪器在使用完毕,要冲洗整个系统,移走系统中的缓冲液。 柱子在不使用时,两端密封保存 在适当的溶剂中保存柱子 注意色谱柱的pH值使用范围 不要高压冲洗柱子 不要高温下过长时间使用硅胶键合相 17 HPLC各模块的工作原理及维护 检测器—DAD ? DAD (Diode Array Detector)二极 管阵列检测器,是以光电二极管 阵列作为检测元件的UV-VIS检测器. ? DAD的光源—氘灯有一定的半衰期, 一般为1000小时左右,所以在没有样 品分析任务时要关闭氘灯,以延长氘



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